細(xì)胞培養(yǎng)過程中,若血清選擇不當(dāng)不僅會造成試驗(yàn)的失敗,而且造成的人力、物力和財(cái)力的損失,特別是對異地珍惜動(dòng)物品種,更是難以想象。但是,目前市場上血清種類繁多,質(zhì)量參差不齊。因此研究不同種類的血清對細(xì)胞培養(yǎng)的影響具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。目的就是追求高效率、低成本,通過對比試驗(yàn)在短時(shí)間內(nèi)找到培養(yǎng)細(xì)胞的血清,從而達(dá)到省時(shí)、省力、省資源的目的。
專用血清中含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成分,血清在體外可以再造適于細(xì)胞生長、繁殖、黏附和分化的生理環(huán)境,是組織細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,在動(dòng)物細(xì)胞生長培養(yǎng)中起著十分重要的作用。血清中的主要成分為蛋白質(zhì)、多肽、激素等,那些被發(fā)現(xiàn)有作用的蛋白質(zhì),主要為白蛋白和球蛋白。
血液凝固析出的淡黃色透明液體,如將血液自血管內(nèi)抽出,放入試管中,不加抗凝劑,則凝血反應(yīng)被激活,血液迅速凝固,形成膠凍。其周圍所析出之淡黃色透明液體即為專用血清,也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點(diǎn)是與血漿的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中,血小板釋放出許多物質(zhì),各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化,如凝血酶原變成凝血酶,并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾,血液中許多化學(xué)成分的分析,都以血清為樣品。
正常專用血清,來源于非免疫的大鼠宿主,經(jīng)過脂質(zhì)萃取PBS溶液透析,改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上,37℃度孵育10-30分鐘,清除血清,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意:封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白,且與一抗來源不同,可用與二抗相同來源的封閉血清。